詳情
儲存條件
儲存于-20℃，有效期一年。
產品介紹
KEIris RT mix with DNase（All-in-One）是將 RNA 合成
cDNA 的一個操作更為簡便的系統，含有第一鏈 cDNA 合成所需的全部試劑，僅需加入 RNA 模板和水即可進行逆轉錄反應，操作非常方便。使用該逆轉錄預混液 15 分鐘內最長可獲得12 kb 大小的cDNA。合成的cDNA 推薦用于qPCR 反應。
該預混液采用特制的高效 DNase，該酶具有熱敏感性， 可在高溫條件下快速不可逆地失活，因此僅需一次加樣，即可同管進行去除基因組 DNA 污染與逆轉錄反應，與使用DNase I 去除基因組 DNA 污染相比，無需額外加入 EDTA 進行失活，不僅減少了對 RNA 模板的損傷、降低 RNase 污染風險，而且節省實驗時間。
1. 在冰浴的無核酸酶的離心管中配制下列逆轉錄體系：
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組分 |
體積 |
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KEIris 5× RT All-in-One Mix |
4 μL |
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dsDNase |
1 μL |
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模板 RNA |
50 ng - 1 μg |
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RNase-free water |
加至 20 μL |
注：推薦使用試劑盒提取的高質量 RNA 作為模板。
2. 輕輕混勻，瞬時離心（使液體沉于底部）；
3. 在PCR 儀上進行下列條件的反應： 37℃溫育 2 min，以去除基因組 DNA 污染； 55℃，溫育 15 min；
85℃，孵育 5 min，以終止反應
4. 將獲得的產物迅速置于冰上或立即保存于-20℃，用于后續實驗。
注意事項
1. RNA 模板的純度和完整性是影響逆轉錄效果的重要因素， 如模板中含有蛋白、EDTA、酚等雜質會使 RNA 降解。
2. 若后續實驗為 qPCR，逆轉錄產物的加量應不超過 PCR 體系終體積的 1/10，如 20 μL 的 PCR 反應體系，逆轉錄產物的加量應不超過 2 μL。
3. 預混液中已經包含 Oligo(dT)20VN 和隨機引物，不僅適用于包含 Poly(A) 結構的真核生物 mRNA，也適用于不含
Poly(A)結構的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不適用于 miRNA 等小 RNA 模板。