當用磺基水楊酸提取植物樣品時，脯氨酸便游離于磺基水楊酸溶液中，然后用酸性茚三酮加熱處理后，茚三酮與脯氨酸發生反應，溶液變為紅色，再用甲苯處理，則色素全部轉移至甲苯中，色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在 λ 520 nm波長下測定吸光度，即可從標準曲線上查出脯氨酸的含量。

1 試劑

（1）3% 磺基水楊酸溶液

（2）2.5% 酸性茚三酮溶液

（3）10 μg/ml脯氨酸標準溶液

（4）冰醋酸

（5）甲苯

2 實驗方法

        2.1 標準曲線的繪制

取7支具塞試管，按下表加入各試劑，迅速混合均勻后，在沸水浴中煮沸30 min，立即取出置于冰水中冷卻。冷卻后準確加入4 ml甲苯，劇烈振蕩30s以萃取紅色物質，靜置片刻后，用吸管輕輕吸取上層脯氨酸甲苯溶液至比色皿中。以0號試管為空白對照，在 λ 520 nm下測定吸光度。以脯氨酸含量為橫坐標，以吸光度為縱坐標繪制標準曲線。

2.2 樣品前處理

稱取0.2 g樣品置于預冷的研缽中，分三次加入6 ml（2 ml、2 ml、2 ml）預冷的3%磺基水楊酸溶液，在冰浴上研磨成勻漿后，轉入具塞試管中，在沸水浴中煮沸10 min（提取過程需經常搖動），取出置于冰水中冷卻，過濾到干凈的試管中，濾液即為脯氨酸提取液。

       2.3 測定方法

（1）吸取2 ml提取液放入具塞試管中，然后加入2 ml冰醋酸和2 ml 酸性茚三酮溶液，迅速混合均勻后，在沸水浴中煮沸30 min，立即取出置于冰水中冷卻。

（2）冷卻后準確加入4 ml甲苯，劇烈振蕩30s以萃取紅色物質，靜置片刻后，取上層溶液至離心管中，4000 r/min離心5 min。

（3）用吸管輕輕吸取上層脯氨酸甲苯溶液至比色皿中。以0號試管為空白對照，在 λ 520 nm下測定吸光度，通過標準曲線方程查得脯氨酸含量。

        2.4 計算公式

其中：

脯氨酸含量以以每微克每克鮮重表示（μg/g·FW）；

C為查標準曲線值（μg）；

V_t為提取液總體積（ml）；

V_s為測定時提取液用量（ml）；

W為樣品鮮重（g）。