在過氧化物酶（peroxidase，POD）催化下，雙氧水（H₂O₂）將愈創木酚氧化成茶褐色產物，此產物在 λ 470 nm處有最大吸收峰，故可以通過測其吸光度的變化測定過氧化物酶的活性。

1 試劑

（1）0.05 mol/L 磷酸緩沖液（PBS，pH 7.8）

（2）0.2 mol/L 磷酸緩沖液（PBS，pH 6.0）

（3）2-甲氧基酚（愈創木酚）

（4）30%雙氧水（H₂O₂）

2 實驗方法

2.1 樣品前處理

稱取0.2 g樣品置于預冷的研缽中，分三次加入6 ml（2 ml、2 ml、2 ml）預冷的磷酸緩沖液（pH 7.8），在冰浴上研磨成勻漿，轉入10 ml離心管中，低溫12000 r/min離心20min，上清夜即為酶粗提液。

2.2 測定方法

（1）反應混合液的配制：取100 ml磷酸緩沖液（pH 6.0）于燒杯中，加入38 μl愈創木酚（2-甲氧基酚）于磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創木酚溶解，待溶液冷后加入56 μl 30％的H₂O₂，混勻后保存于4℃備用。

（2）酶活性測定：取3 ml反應混合液，加入35 μl酶液（可視情況調整）后測定470 nm下的吸光度，10 s測定一次，測定120 s。以PBS（pH6.0）代替酶液作為對照調零。

2.3 計算公式

以每分鐘內OD值變化（升高）0.01為一個酶活性單位（U）。按下式計算酶活性：

其中：

過氧化物酶活性以酶單位每克鮮重每分鐘表示（U/g·min）；

ΔA₄₇₀為反應時間內吸光度的變化；

V_t為提取酶液總體積（ml）；

V_s為測定時酶液用量（ml）；

W為樣品鮮重（g）；

t為反應時間（min）。