過氧化氫酶（catalase，CAT）是一種廣泛存在于生物組織中的氧化還原酶，它能催化過氧化氫（H₂O₂）分解為水和氧氣，清除組織中的過氧化氫。H₂O₂在 λ 240 nm處有一個吸收高峰，其吸光度與H₂O₂的含量成正比，過氧化氫酶能分解H₂O₂，使反應溶液吸光度A₂₄₀隨反應時間而降低。單位時間內吸收的差值就是過氧化氫酶的活性。

1 試劑

（1）0.05 mol/L 磷酸緩沖液（PBS，pH 7.8）

（2）0.15 mol/L 磷酸緩沖液（PBS，pH 7.0）

（3）30%雙氧水（H₂O₂）

2 實驗方法

2.1 樣品前處理

稱取0.2 g樣品置于預冷的研缽中，分三次加入6 ml（2 ml、2 ml、2 ml）預冷的磷酸緩沖液（pH 7.8），在冰浴上研磨成勻漿，轉入10 ml離心管中，低溫12000 r/min離心20min，上清夜即為酶粗提液。

2.2 測定方法

（1）反應混合液的配制：取100 ml磷酸緩沖液（pH 7.0）于燒杯中，加入155 μl 30％的H₂O₂，混勻后保存于4℃備用。

（2）酶活性測定：取2.9 ml反應混合液，加入40 μl酶液（可視情況調整）后測定λ 240 nm下的吸光度，10 s測定一次，測定120 s。以PBS（pH 7.0）代替酶液作為對照調零。

2.3 計算公式

以每分鐘內OD值變化（降低）0.01為一個酶活性單位（U）。按下式計算酶活性：

其中：

過氧化氫酶活性以酶單位每克鮮重每分鐘表示（U/g·min）；

ΔA₂₄₀為反應時間內吸光度的變化；

V_t為提取酶液總體積（ml）；

V_s為測定時酶液用量（ml）；

W為樣品鮮重（g）；

t為反應時間（min）。